原理

色譜條件

悟空K2025高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動(dòng)進(jìn)樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD 紫外-可見光檢測(cè)器、K2025ELSD 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、Wookinglab色譜工作站；

色譜柱：C₁₈，4.6×250 mm，5 µm或者相當(dāng)?shù)纳V柱；

流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫：

注：為了系統(tǒng)在進(jìn)樣前達(dá)到平衡，每次進(jìn)樣前運(yùn)行10min。

進(jìn)樣量：酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液5 μL、15 μL，供試品溶液及斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液10 μL；

洗針液：90 %甲醇水溶液；

柱溫：25℃；

檢測(cè)器及參數(shù)：紫外-可見光檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，蒸發(fā)溫度為80℃，氣體流量為3.0 L/min。

使用紫外-可見光檢測(cè)器對(duì)斯皮諾素測(cè)定

重復(fù)性測(cè)試

按照色譜條件進(jìn)行采集，將斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為50 μg/mL）進(jìn)樣10 μL，色譜圖如圖1所示，積分結(jié)果如表1所示。

圖1 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

表1 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖積分結(jié)果

由表1中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素峰的理論塔板數(shù)為48818，拖尾因子為1.21，具有良好的峰形。

將斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針，疊加的色譜圖如圖2所示，結(jié)果見表2。

圖2 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針疊加的色譜圖

表2 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針重復(fù)性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

由表2中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針，保留時(shí)間的RSD為0.09 %，峰面積的RSD為0.40 %，具有良好的定性定量重復(fù)性。

含量測(cè)定

按照色譜條件，將斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液上機(jī)測(cè)定，斯皮諾素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，確定系數(shù)R²＞0.999。斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液疊加的色譜圖如圖3所示。

圖3  斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液疊加的色譜圖

使用蒸發(fā)光檢測(cè)器對(duì)酸棗仁皂苷A的測(cè)定

酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液色譜圖

按照色譜條件進(jìn)行采集，將酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液進(jìn)樣15 μL，色譜圖如圖4所示，積分結(jié)果如表3所示。

圖4  酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖

表3  酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液色譜圖積分結(jié)果

由表3中數(shù)據(jù)可知，酸棗仁皂苷A峰的理論塔板數(shù)為503314，拖尾因子為1.08，具有良好的峰形。

含量測(cè)定

外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程

精密吸取酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液5 μL、15 μL與供試品溶液10 μL，依次注入液相色譜儀中測(cè)定。不同進(jìn)樣量酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖如圖5所示。

圖5  不同進(jìn)樣量酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖

結(jié)論